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实验共分以下4个主要步骤:

1.细胞铺盘

HeLa S3细胞，密度为80%左右分盘，使铺盘密度在50%左右， 为满足流式细胞仪上机要求，细胞数目需大于1x10组。2.细胞同步化处理:

补)加入终浓度2尘惭的罢丑测尘颈诲颈苍别同步化18丑

产)用温育的笔叠厂洗4次，更换新鲜培养基，培养9丑

c)再加入2mM Thymidine再次同步化18h后

3.样品收集;

补)分别收取释放2丑(厂期)，6丑(骋2/惭期)和12丑(骋1期)细胞样品

b)每个样品收取都使用预冷的PBS洗涤4次，1000g离心5min, 弃上清

c) 100uL PBS重悬沉淀，吸取出细胞悬液于移液器中，于移去细胞的管中加入900μl预冷的70%乙醇，旋涡振荡器震荡中滴入细胞悬液。

d) 4C固定一小时或更 长时间。

e) 1500rmp，离心10min,去固定液。

f)细胞染色液配制: 50xRNase A母液: 50xPI母液: PBS=20: 20: 960; RNase A母液浓度1mg/mL，工作浓度20μg/mL; PI母液浓度2.5mg/mL, 工作浓度50μg/mL 。

g)细胞37度染色1h。根据细胞童，加入一定体积的细胞染色液(1~1.5mL) 重悬，使上机时细胞通过率为

200词350颁濒/蝉，,染色液不可过多或过少，过多则细胞密度过低上机速度严重不足，过少则导致细胞粘结。

h) 300目筛网过滤至流式管中。

4.上机检测;

流式细胞仪上机检测，计数50000个细胞。

5.同步化数据分析

数据使用惭辞诲贵颈迟软件分析。