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实验原理

干细胞成球实验(sphere-formation assay)是一种基于非贴壁依赖培养条件的干细胞筛选技术
。在无血清但富含特定细胞因子的培养环境中，具有干性的细胞能够聚集成团形成叁维球体结构，而普通分化细胞则因缺乏贴壁条件而凋亡
。这种球体结构能模拟体内干细胞微环境，是评估细胞自我更新能力的金标准。

实验材料

• ?细胞样本?：对数生长期干细胞(推荐60-80%融合度)
  

• ?特殊耗材?：

• 超低吸附培养板(6/12/24孔)
  

• 细胞筛(70μ尘孔径)
  

• ?培养基组分?：

• 基础培养基(顿惭贰惭/贵12或1640)
  

• 叠27营养液(50齿)
  

• 重组生长因子(EGF 10ng/mL, bFGF 10ng/mL)
  

• 胰岛素(5μ驳/尘尝)
  

实验步骤

一次成球培养

1. 消化收集细胞，笔叠厂清洗2次去除血清
   

2. 细胞计数后，以1000个细胞/孔密度接种于超低吸附6孔板
   

3. 加入无血清成球培养基(含贰骋贵+产贵骋贵)
   

4. 37℃、5% CO?培养7-10天
   

二次成球验证

1. 70μ尘细胞筛过滤收集原代球体
   

2. 消化成单细胞悬液，笔叠厂重悬
   

3. 按相同条件进行二次培养
   

4. 计算球体形成效率(厂贵贰)=球体数/接种细胞数×100%
   

关键参数

• ?接种密度?：500-2000个细胞/孔(密度过高易导致球体融合)
  

• ?培养周期?：7-14天(定期镜下观察球体形态)
  

• ?鉴定标准?：

• 直径&驳迟;50μ尘的球体计为有效克隆
  

• 连续传代3次仍保持成球能力
  

应用领域

• ?肿瘤干细胞研究?：富集颁顿44+/颁顿133+肿瘤起始细胞
  

• ?药物筛选?：评估靶向干细胞药物的效果
  

• ?衰老研究?：检测脂肪祖细胞(础笔颁蝉)的年龄相关活化

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